阳性克隆 阳性克隆是什么意思

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文章内容目录：
1、基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆
2、筛选阳性克隆
3、什么叫阳性克隆筛选法? 请打击帮帮忙!!
详细内容：
1.基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆
简单的说一下：

1. 扩增目的基因，比如通过PCR的方法。
2. PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。
3. 转染大肠杆菌
4. 筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。
5. 挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。

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2.筛选阳性克隆
BamH 1 的酶切位点在tet上，所以酶切重组后，质粒就不会再表达四环素抗性抗性了，筛选阳性克隆要挑选在Amp平板上生长的菌株，而在Tet平板上生长的菌株是插入失败的。
3.什么叫阳性克隆筛选法? 请打击帮帮忙!!
这是一种分子生物学的方法。比如，在大肠杆菌中导入一个目的基因，要怎样才知道有没有导入进去呢？所以要同时导入一个报告基因（目的基因和报告基因位于同一个载体上）。导入了报告基因的大肠杆菌在含抑制性物质的培养基上就可以生长，而不含报告基因的大肠杆菌（就是转化失败的）就不能生长。这样过了两三天后，在培养基上看见的菌落就是阳性科隆。这一过程就是阳性科隆筛选。一般选用的报告基因像青霉素抗性基因，链霉素抗性基因等等。如果还想了解得更详细，就去买本分子生物学实验书或入门书籍看看就明白了。
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