一、过氧化氢酶（滴定法）

1、试剂

0.3%的过氧化氢溶液：将30%过氧化氢稀释100倍。

3N硫酸：吸取10mL盐酸用蒸馏水稀释至50ml。

0.1N高锰酸钾溶液：1.58g高锰酸溶于100ml水。

2、主要仪器

万分之一分析天平、震荡器、滴定管、试管夹

3、试样的制备

取新鲜的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至100g，粉碎，然后全部通过10目孔径筛，装入样品袋备用。

4、实验方法

4.1.称取2g试样于50ml离心管中，加40ml蒸馏水，5ml0.3%过氧化氢溶液于震荡机震荡20min，取出后加入5ml3N硫酸，过滤后取25ml滤液与150ml三角瓶中，用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉红色。

4.2.空白：不加土样, 其他操作与样品试验相同。

5、计算方法

过氧化氢酶活性= (V-VS)C×51/V0×17/W

V：为滴定空白所用的KMnO4体积；

VS：为滴定样品所用的KMnO4体积；

C: 为KMnO4浓度；

V0：为滴定体积25ml；

W：为土重；

二、过氧化物酶（比色法）

1、试剂配制

1%邻苯三酚溶液：称取1g邻苯三酚，用蒸馏水融至100ml。

0.5%H2O2溶液：取1ml30%H2O2稀释至60ml。

乙醚

0.5mol/L HCL：吸4.17mL的浓盐酸溶于100mL水。

PH4.5柠檬酸磷酸缓冲溶液:0.1mol/L柠檬酸溶液: 19.2g C6H7O8溶至1L。0.2mol/L磷酸氢二钠溶:53.63gNa2HPO4.7H2O或者71.7g Na2HPO4.12H20溶至1L。取10.65ml柠檬酸和9.35mINa2HPO4混匀(用量较多可以乘以倍数配制)，之后再用这两种溶液调节PH即可。

重铬酸钾标准溶液：0.75g重铬酸钾溶于1L0.5mol/LHCL溶液中。此时的溶液相当于50ml醚中含有5mg紫色没食子素。

2、主要仪器

万分之一分析天平、恒温摇床、分光光度计

3、试样的制备

取新鲜的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至100g，粉碎，然后全部通过10目孔径筛，装入样品袋备用。

4、分析步骤

4.1.试样溶液提取

称取试样1g，精准至0.001g，置于50ml离心管中，然后注入10m1%邻苯三酚溶液和2ml0.5%H2O2溶液。震荡后放置30°C恒温培养箱中培养2小时。取出待测。

4.2.空白溶液制备

除不加待测样品外，应用的试剂和步骤操作同4.1。

4.3.对照试样溶液制备

除用10 mL蒸馏水代替基质（邻苯三酚溶液）外，应用的试剂和步骤操作同4.1。

4.4.标准曲线绘制

取重铬酸钾标准溶液0、1、2、4、6、8ml于比色管中用0.5mol的HCL稀释至50ml。定容后，在分光光度计。上于430nm处比色测定。以吸光度为横坐标，以浓度为纵坐标绘制标准曲线。

4.5.试样测定

试样滤液加4mlPH4.5的柠檬酸-磷酸缓冲溶液，再加35ml乙醚， 用力震荡数次，萃取30min。最后，将含溶解的紫色没食子素的着色乙醚相比色。比色波长为430nm。为了防止因乙醚引起的误差，每比色一次用无水乙醇洗涤比色槽一次。

5、结果计算

过氧化氢酶活性，以2h后，1g土壤生成的紫色没食子素毫克数表示。

过氧化物酶活性= (a样品-a空白-a无基质) ×V/m

a为标曲上相对应的浓度。

V为显色体积，即为乙醚的体积35ml。

m为样品重量g。

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