大肠杆菌质粒 大肠杆菌质粒提取原理

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文章内容目录:
1、什么是大肠杆菌质粒载体?
2、大肠杆菌细胞中都有质粒DNA对吗?答案说不对,但是我记得基因工程那还有用它质粒的啊,求解,给好评
3、提取细菌质粒的原理及方法
详细内容:
1.什么是大肠杆菌质粒载体?
大肠杆菌质粒载体是应用最广泛的克隆载体,含有大肠杆菌源质粒的复制起始位点,能够在转化的大肠杆菌中按质粒复制的形式进行复制。pBR322是一种常用的典型质粒载体。pBR322由大肠杆菌源质粒emphasis:role=italicColemphasis:E1衍生的质粒pMB1作为出发质粒构建而成,含有emphasis:role=italicColemphasis:E1复制起始位点(Col-ori),能在大肠杆菌细胞中高拷贝复制。pBR322具有四环素抗性基因(emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis)和氨苄青霉素抗性基因(emphasis:role=italicampsuperscriptrsuperscriptemphasis)两种抗性,作为筛选转化子的选择标记基因。在emphasis:role=italicampsuperscriptrsuperscriptemphasis基因区有限制性内切核酸酶emphasis:role=italicPstemphasisI、emphasis:role=italicScaemphasisI和emphasis:role=italicPvuemphasisI的识别序列,在emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis基因区有限制性内切核酸酶emphasis:role=italicBamemphasisHI、emphasis:role=italicSalemphasisI、emphasis:role=italicEcoemphasisRⅤ的识别序列,以及在emphasis:role=italictetsuperscriptrsuperscriptemphasis基因的启动调控区有emphasis:role=italicClaemphasisI和emphasis:role=italicHinemphasisdⅢ的识别序列。并且这些限制性内切核酸酶在此质粒载体上只有一个识别序列,因此均可作为克隆外源DNA片段的克隆位点。pBB322分子大小为4363bp,虽然不是很小,但足以克隆10kb以下的外源DNA片段。此质粒载体主要用于基因克隆,此外也常常作为构建新克隆载体的骨架,或取其基本元件。为了便于外源DNA片段的克隆,在载体合适的位置组装一个多克隆位点(MCS)连杆,如常用的质粒载体pUC18和pUC19(link:xlinkhref=i010502图4-4link)。pUC18和pUC19两者的差别只是多克隆位点上各种克隆位点的走向相反。设计这样一对质粒载体,便于用两种限制性内切核酸酶酶切产生的一个DNA片段以正、反两个方向组入载体,保证DNA片段中基因的信息链与质粒载体信息链连接,进行有效的表达。
大肠杆菌质粒 大肠杆菌质粒提取原理
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2.大肠杆菌细胞中都有质粒DNA对吗?答案说不对,但是我记得基因工程那还有用它质粒的啊,求解,给好评
那是经过处理之后才叫质粒
3.提取细菌质粒的原理及方法
提取细菌或是其他原核生物,就可以用,反转录法;如果要提取人或是其他真核生物,就用鸟枪法,因为真核生物基因的编码区不是连续的,有内含子
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